Імунофіксація

Імунофіксаційний електрофорез

Набори Hellabio Immunofixation Electrophoresis (IFE) призначені для in vitro діагностики моноклональних парапротеїнів у сироватці крові людини та інших біологічних зразках. У деяких патологічних випадках (множинна мієлома тощо) на електрофорограмі з’являються аномальні моноклональні смуги. Ідентифікація цих моноклональних смуг може бути здійснена за допомогою різних імунологічних методів, таких як імуноелектрофорез та імунофіксаційний електрофорез (IFE) .

Імунофіксаційний електрофорез слід регулярно проводити на зразках із підвищеною концентрацією β ₁ або β ₂ , особливо якщо немає очевидної причини для пояснення підвищення, наприклад, дефіцит заліза або підвищення β-ліпопротеїну або C3, навіть якщо немає аномалій у Шаблон SPE. 

Виявлення парапротеїнової смуги за допомогою електрофорезу завжди повинно супроводжуватися специфічним типуванням смуги [імунофіксація]. Важливо ідентифікувати компоненти важкого та легкого ланцюга, оскільки це підтверджує моноклональність, а парапротеїновий тип може надати клініцисту додаткову інформацію про основну пухлину та прогноз.

Також ви можете ознайомитись з таблицею сивороткових білків та з таблицею виявлення та
ідентифікації парапротеїнів у сироватці.

Парапротеїни

Виявлення парапротеїнів

Електрофорез у агарозі  є найпоширенішим методом клінічної діагностики для виявлення парапротеїнів у сироватці крові та сечі.

Парапротеїнові смуги можуть бути «пропущені», якщо вони мають низьку концентрацію в сироватці (<5,0 г/л) та/або якщо їх рухливість збігається з іншими смугами, такими як бета-глобуліни. Також можна пропустити парапротеїни, якщо немає пригнічення нормальної концентрації імуноглобуліну

Імунофіксацію  слід проводити на зразках, якщо не виявлено явної парапротеїнової смуги, але є підвищений IgA або IgM без посиленого фарбування бета-гамма-області, що пов’язано з поліклональним підвищенням IgA або IgM. Парапротеїни IgD і вільні важкі ланцюги чутливі до постсинтетичної деградації, що призводить до появи дифузних парапротеїнових смуг під час електрофорезу. Вони можуть бути пропущені, якщо присутні в низьких концентраціях або якщо очікується побачити чітку смугу.

Існує ряд ситуацій, коли в електрофоретичному розділенні сироватки видно смугу, яка не є моноклональним імуноглобуліном; до них належать:

• додаткові смуги в альфа-1-області внаслідок алотипової варіації α-1-антитрипсину
• розщеплена альфа-2 зона через різну рухливість гаптоглобін-гемоглобінового комплексу після внутрішньосудинного гемолізу
• додаткова смуга в бета-гамма-області через високі концентрації С-реактивного білка
• додаткові смуги в швидкій гамма-області через присутність фібриногену.

Варто також відзначити, що деякі парапротеїни випадають в осад при температурі нижче 37 ^o C – так звані  кріопротеїни [Кріоглобуліни].  Зразки, у яких розглядається кріопротеїн, необхідно зібрати, транспортувати та відокремити при 37 ^o C. Якщо цього не зробити, кріопротеїн може випасти в осад, який згодом буде викинутий разом із осадом виклику.

Кількісне визначення сироваткових парапротеїнів

Імунохімічне кількісне визначення парапротеїнів є ненадійним. Для вимірювання концентрації парапротеїну рекомендується денситометричне сканування (HellabioScan) електрофоретичного розділення гелю. Важливо знати, що між альбуміном і глобулінами існує різне зв’язування барвника, тому найточнішу оцінку парапротеїну можна отримати за відсотком відносного зв’язування барвника смуги парапротеїну порівняно із загальною фракцією глобулінів, а не загальною фракцією білок. Також важливо відзначити, що існує нелінійний зв’язок між зв’язуванням барвника та концентрацією білка при високих концентраціях парапротеїну.

Вимірювання загального білка сироватки та альбуміну, як правило, є надійним, і може бути корисним використовувати ці дві концентрації як «приблизну перевірку» кількісного визначення парапротеїну. Концентрація альбуміну, додана до концентрації парапротеїну, не може перевищувати загальну концентрацію білка, і (зважаючи на те, що може існувати диференційоване зв’язування альбуміну з глобуліном) смуги подібних ділянок повинні мати однакову концентрацію.

Кількісне визначення білка Бенс-Джонса

Кількісне визначення BJP рекомендовано як критерій відповіді, прогресування рецидиву множинної мієломи при лікуванні високими дозами терапії та трансплантації стовбурових клітин. Це має бути зроблено так само, як кількісне визначення парапротеїну сироватки, шляхом денситометрії електрофорезу сечі та розрахунку парапротеїнової смуги щодо загального білка в сечі (довільно або 24-годинно).